白芨[Bletillastriata（Thunb.）Reichb.f.]又叫明白芨、紫兰根、甘根、白给，为兰科（Orchidaceae）白芨属（BletillaReichb.f.）多年生草本植物[1，2]。白芨块根为名贵药材，具有收敛止血、消腫生肌的功效，民间用于治疗外伤出血、烧伤烫伤、手足皲裂等[3]。白芨种子细小、种皮为单层细胞组成，胚不分化，无胚乳，在野生条件下很难萌发[4]。加上多年的过度采挖及环境的日益恶化，野生白芨的数量急剧减少。白芨目前已被列为国家珍稀濒危保护植物[5]。目前市场上白芨人工栽培主要依靠分株繁殖[6]，这种繁殖方式不仅周期长，技术不成熟，而且由于缺乏优良品种，很难满足白芨的市场需求[7-10]。因此，保护白芨资源、解决白芨繁殖困难的问题迫在眉睫。有关白芨的快速繁殖已有许多报道，袁宁等[11]发现，白芨组织培养受培养基影响较大，最适合萌发的培养基是MS基本培养基；张燕等[12]发现低浓度的6-BA、KT抑制白芨种子的萌发和生长；喻苏琴等[13]利用白芨种子进行无菌播种，比较了培养条件对白芨种子萌发的效应。本试验通过改变植物生长调节剂组合及其浓度配比，比较了植物生长调节剂对白芨种子萌发的影响，筛选丛生芽增殖培养和生根培养的 培养基，旨在为建立无性繁殖体系、实现白芨快速繁殖和工厂化生产提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料及处理
白芨种子及其无菌苗以及植物生长调节剂NAA、6-BA、2，4-D、GA3由生物资源保护与利用湖北省重点实验室提供；选取白芨种子作为外植体，流水冲洗2h后用滤纸吸干水分，在超净工作台上用75%乙醇浸泡30s左右，然后用0.1%的升汞振荡消*3min，去离子水清洗5次，再接种到培养基中。
1.2基本培养条件
试验里基本培养基均为MS培养基，加蔗糖25mg/L、琼脂6.5mg/L、活性炭1mg/L；培养室内的环境条件均为温度25～28℃，光照度lx，光照时间10h/d。
1.3培养方法
1.3.1种子萌发培养基筛选在MS基本培养基里添加不同浓度的NAA（0.1、0.2、0.3、0.4mg/L）和6-BA（1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0mg/L）两两组合，有24个处理，另设一空白对照（CK1），共25个处理，处理编号1～25，每个处理接种10瓶，将准备好的白芨种子随机选取10粒，用移液枪均匀地接种在含有不同植物生长调节剂组合的培养基上，培养条件为前述的基本培养条件。20d后观察培养结果，以筛选出白芨种子萌发的 培养基。
1.3.2愈伤组织诱导培养基筛选切取白芨种子萌发的无菌苗茎段（约0.5cm）作为外植体，接种至MS培养基中，添加不同浓度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0mg/L）和2，4-D（0.5、1.0、1.5、20mg/L）两两组合，有16个处理，另设一空白对照（CK2），共17个处理，处理编号26～42，每个处理接种10个外植体，10次重复，置于培养室中培养，培养条件同上，30d后计算其诱导率。
1.3.3丛生芽增殖培养基筛选将白芨的愈伤组织接种至MS培养基中，添加不同浓度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0mg/L）和NAA（0.10、0.15、0.20mg/L）两两组合，有12个处理，另设一空白对照（CK3），共13个处理，处理编号43～55，每个处理接种3个外植体，10次重复，置于培养室中培养，记录丛生芽的增殖情况，到60d计算诱导率。
1.3.4生根培养基筛选剪取上述培养得到的单根芽，接种到MS培养基中，附加不同浓度的GA3（0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/L），共6个处理，处理编号56～61，置于培养室中培养，培养条件同上，培养25d后观察白芨丛生单根芽的生根状况，筛选适合白芨丛生单根芽生根的 培养基。
1.4炼苗移栽
选取生长旺盛、叶片多且根系发达的白芨组培生根苗，打开瓶盖，放置在培养室中驯化3～5d；然后小心取出生根苗，用流水洗净根部的培养基，移栽至分别由蛭石、珍珠岩、泥炭组成的栽培基质中，在植物培养室中培养30d，培养温度25℃，光照度lx，光照时间15h/d，观察并记录白芨组培生根苗在各栽培基质中的生长情况和存活率。
2结果与分析
2.1NAA和6-BA对白芨种子萌发的影响
植物生长调节剂NAA和6-BA对白芨种子萌发的影响情况见表1。从表1可知，不添加植物生长调节剂的处理其白芨种子萌发率很低，仅为7%；NAA与6-BA以一定浓度配比后，白芨种子才能取得较好的萌发效果；其中以NAA0.3mg/L+6-BA1.6mg/L组合的白芨种子萌发率 ，可达98%。
2.26-BA和2，4-D对白芨愈伤组织诱导的影响
植物生长调节剂6-BA和2，4-D对白芨种子萌发的无菌苗茎段愈伤组织诱导的影响情况见表2。从表2可知，添加不同浓度配比的6-BA和2，4-D培养基对白芨无菌苗茎段愈伤组织的诱导有不同的影响作用，其中6-BA浓度为1.0mg/L、2，4-D浓度为1.5mg/L时，诱导率 ，为67%，诱导效果相对 。
2.3NAA和6-BA对白芨愈伤组织丛生芽增殖的影响
植物生长调节剂NAA和6-BA对白芨愈伤组织丛生芽增殖的影响情况见表3。从表3可见，添加不同浓度配比的NAA和6-BA对白芨愈伤组织丛生芽增殖有不同的影响，其中6-BA浓度为1.0mg/L、NAA浓度为0.15mg/L时，增殖效果最明显，诱导率达96.7%。
2.4GA3对白芨丛生单根芽生根的影响
植物生长调节剂GA3对白芨丛生单根芽生根的影响情况见表4。由表4可知，不添加任何植物生长调节剂时，白芨丛生单根芽长势差，添加适当低浓度的GA3可以促进白芨丛生单根芽生根，其中0.5mg/LGA3处理的生根效果最明显，但GA3促进白芨生根的机制尚不清楚。关于GA3促进植物生根的情况也有报道，陈仕江等[14]发现适当浓度的GA3能促进金钗石斛（DendrobiumnobileLindl.）的生根。刘世彪等[15]发现GA3可以提高火棘[Pyracanthafortuneana（Maxim.）Li]插条的生根率。
2.5组培苗的移栽
用蛭石、珍珠岩、泥炭不同栽培基质种植白芨组培生根苗，比较各栽培基质对白芨组培生根苗存活和生长的影响，结果见表5。从表5可知，以泥炭作为基质移栽白芨组培生根苗的生长状况 ，存活率 ，达到96.7%，其原因可能是泥炭中富含豐富的有机质、有助于白芨组培生根苗的生长所致。
3小结
试验选取从种子→无菌苗→愈伤组织→丛生芽诱导→单根芽诱导生根→炼苗移栽这一技术流程，建立了白芨快速繁殖体系，实现了白芨组织培养苗的快速大量繁殖。结果显示，白芨种子萌发的 培养基为MS+1.6mg/L6-BA+0.3mg/LNAA；愈伤组织诱导的 培养基为MS+1.0mg/L6-BA+1.5mg/L2，4-D；丛生芽的增殖效果最明显培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA；0.5mg/L的GA3对促进白芨丛生单根芽生根的作用最明显，白芨组培苗移栽的基质以泥炭 。
作者：毛鑫王锋杨传桃
来源：《湖北农业科学》年20期
版权归原作者所有！本平台整理发布
长按识别